单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于表面抗原动物群活性朋友、寡核苷酸遮盖投入昂贵或进行方法复杂性。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯老师团队合作在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低总成本、跨种类、全公司兼容的全新解决方案。

刊物介绍

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由在我国实验合理性院显性基因与生长微植物学学习所和在我国显性基因直到学会举办的国际金学术研究界杂志杂志论文期刊论文，专注于于通讯稿宝宝实验合理性和中医学显性基因学各个域的亿人性学习工作成效。JGG 202四年度的影响指数7.1，Scopus学术研究界杂志杂志论文期刊论文评论目标CiteScore 9.9，排第JCR 202四年度GENETICS & HEREDITY各个域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY各个域Q1区，排第在我国实验合理性院杂志杂志论文期刊论文系统分割微植物学专业类别1区(Top杂志杂志论文期刊论文)，显性基因学和生化学与原子核微植物学小类双1区。

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些什么才叫HEATag

精巧的“二合并”装修设计

HEATag是由凝集素和HUH内切酶搭建的相融合血清

「标记器」控制模块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化表达（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「接连器」电源模块 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）引索长商品条形码去共价对接。

“1+1>2”的功效：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样版标志与追根。

Fig1: HEATag多个标注的原理示图图

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实用技巧检则

HEATag到最后有多用打？

不错在各种因素下，实现了蒲乳期动植物生殖生殖细胞系单生殖生殖细胞混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。探索的团队为 HEATag 放置了多轮 “气压测量”，从細胞系到細胞核，从环境温度到环境温度，从新鲜样板到固定不动样板，全定位效验它的动态平衡性和稳定可靠度。

第1轮检查专门针对乳期家禽内部系：调查的人员使用了出自于人、鼠、仓鼠三种动物群的四种方式内部（HEK293T、K562、MEF、CHO），在环境温度下要 HEATag 标志后混和测序。结果英文回收处理的 11447 个内部中，85.66% 都能依据 HEATag 方形码较准配备到原动物群，样板间交叠污染源很少，UMAP 聚类数据分析法数据分析也可以直接证明文件，HEATag 方形码与动物群活性聊天人类基因组特征英文非常高度。 随后，试验的能力进步上升：设计有关于人员常试在 4℃下标上生鲜細胞系、在常温下标上甲醇固定住好細胞系，以及随便标上細胞系核。最后还优异：拥有的能力下，样品标示与种类短信均极具比较好的有关于性，分割更准确度超 95%。殊不知甲醇固定住好会促使一些的转录本相互被污染的，細胞系核配制出现极富 RNA 匮乏，細胞系类行的批注最后还与生鲜样品长期保持高度，证明文件 HEATag 还可以标上各个处理的能力下的试验样品。

Fig2: HEATag 可在各种不同的条件下成功完成单細胞转录组混样定量分析

能够标记图片哺乳期两栖動物和海洋环境无脊梁骨两栖動物的原代内部

要是说聚集系测验是 “基础条件题”，那聚集样例这就是 “扣减题”， 等等样例并不因聚集类型的繁杂、坏境认知性特出，是标记符号水平的 “问题”，而 HEATag 刚好在等等 “问题” 上出现了特色。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组建，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞仅仅能被正确辨别，拥有重要上皮细胞类型的的聚类分析法结果显示都明白可辨。

更令人惊喜的是HEATag对浮游生态学生态学的更换性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长条码与种类转录组具有着较高不一样性，沒有会出现因高盐环镜引起的 “标出损坏”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可改变哺乳期间昆虫策划 样板几吨 scRNA-seq 分析一下

Fig4: HEATag可实现了鲜新浮游生物无脊椎骨宠物多个 scRNA-seq 进行分析

HEATag与癌细胞的通过不用引致转录组的相关系数变动

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在进行标上每日任务的而且，不想对后继的转录酚类化合物析发生打扰，保障了实验统计数据的最正确性。

Fig5: HEATag也不会会影响样本量的 RNA 表达爱模试

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未来是什么可期

HEATag 能为单细胞核研发引来哪种？

HEATag 的价值量，远不单单于 “完成箭头的问题”，它的比较灵活力性和共通性，将要为单血细胞探析点击更加多也许 性

从软件应用3d场景看来

HEATag 能合并从 “简便相对比较讲解”（如癌公司与顺利公司、类药治理 与照表）到 “大总量科学研究分析”（如公司体神经细胞图谱编写、高通骁龙量诉求）的全条件诉求。伴随 PIP-seq、Stereo-cell 等新型的可括展技巧的进步，HEATag 还能进两步大幅提升单体神经细胞科学研究分析的通量，推动教学科研大型项目团队开设较大总量的大型项目。

从跨业务领域潜质方面看

HEATag 不只应中用转录组学，还能与表观什么是基因组学、血清质组学、空间组学等技木搭配，确认拜谱生物检索和寡核苷酸队列，HEATag 也可以轻轻松松营造不同的的组学程序，不影晌数据信息驯服进一步。同时，研发背景HEATag还也可以不断发展单人体细胞糖组学研发技木。

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合伙动态性

拜谱微生物与陈凯专家教授实现目标总体加盟意想

需要留意的是，在 HEATag 方法凸显出非常大的采用空间的大环境下，拜谱动物已与中国南方海域动物技术学与建筑项目四川运转室（东莞）陈凯硕士生导师确定进行初步企业合作意愿。另一方运转规划环绕 HEATag 方法的文化产业的发展真正落地、成果转变转变等方问选取高度合作，统筹推进这样成本分析费用、跨外来物种的单血人体细胞膜标签方法快一点采用于实际的成果转变场所，为较多运转室提供了高效率的、经济发展的单血人体细胞膜调查方式，推助成果转变运转者在血人体细胞膜动物学、海域动物学、传染性疾病措施等域提供较多的提升